發(fā)布時(shí)間: 2024-03-21 點(diǎn)擊次數(shù): 1185次
ATCC細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)室常用的細(xì)胞模型,被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)研究。當(dāng)從液氮或超低溫冰箱中解凍這些細(xì)胞后,為了確保細(xì)胞活性和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,研究人員需要執(zhí)行一系列關(guān)鍵步驟:
1.快速解凍:迅速將凍存管從冷凍環(huán)境中取出,并立即置于37℃水浴中,以最快速度解凍細(xì)胞。避免細(xì)胞在冰晶形成過(guò)程中受到損傷,防止因緩慢解凍導(dǎo)致的滲透壓變化損害細(xì)胞膜。
2.清潔消毒:在操作前確保工作臺(tái)面、設(shè)備和手部都已經(jīng)進(jìn)行了全消毒,以避免交叉污染。使用70%乙醇對(duì)凍存管外壁進(jìn)行消毒,并在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移細(xì)胞。
3.離心去凍存液:解凍后立即將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有適量培養(yǎng)基的離心管中,通過(guò)輕柔離心使細(xì)胞沉淀,去除含有DMSO的凍存液,因?yàn)镈MSO可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性影響。
4.溫和重懸:丟棄上清液后,加入預(yù)熱的適當(dāng)培養(yǎng)基,用移液器輕柔吹打或輕輕搖晃離心管,使細(xì)胞溫和地懸浮在培養(yǎng)基中。
5.接種細(xì)胞:將重懸的細(xì)胞接種到含有適量全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或皿中,輕輕晃動(dòng)容器使細(xì)胞均勻分布。
6.環(huán)境適應(yīng):將細(xì)胞置于恒定溫度的CO2培養(yǎng)箱中,允許細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境,靜置數(shù)小時(shí),待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行檢查。
7.次日檢查:在接種后的24小時(shí)內(nèi)觀察細(xì)胞附著情況,評(píng)估存活率和生長(zhǎng)狀態(tài)。如果有必要,更換新鮮培養(yǎng)基以提供充足營(yíng)養(yǎng),同時(shí)移除死亡細(xì)胞和其他殘留物。
8.常規(guī)維護(hù):根據(jù)細(xì)胞類型和推薦的條件,定期更換培養(yǎng)基,監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng),并進(jìn)行必要的傳代培養(yǎng)。
9.記錄與追蹤:詳細(xì)記錄解凍日期、批次、存活率、培養(yǎng)條件等重要信息,以便未來(lái)跟蹤實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果。
10.避免污染:所有操作應(yīng)在無(wú)菌條件下完成,避免細(xì)菌或真菌污染,這可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
正確處理解凍后的ATCC細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。保持細(xì)胞活力的同時(shí),避免污染和誤操作是保證數(shù)據(jù)可靠性和可重復(fù)性的重要前提。通過(guò)遵循上述步驟,研究人員可以確保其體外實(shí)驗(yàn)的有效性,為取得準(zhǔn)確和有意義的實(shí)驗(yàn)結(jié)果打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。