什么是內(nèi)參？

Western Blot常用來比較不同條件下或不同細胞組織中目標蛋白表達量的相對多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎。在Western Blot實驗中，可能因總蛋白濃度測定不準確，或是蛋白質上樣時因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設置內(nèi)部參照組來進行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細胞或組織間表達相對恒定，且有高水平的表達量，來確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對應的抗體就稱為內(nèi)參抗體。

內(nèi)參在WB實驗中的重要性。

1 用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同。可從條帶粗細初步判定上樣量是否有差異。進一步使用影像分析程序將目標蛋白量除以內(nèi)參含量，所得到的數(shù)值即為校正后的目標蛋白相對含量，如此就可以進行目標蛋白相對量的比較。

2 確認轉膜、顯色等步驟是否均勻轉移、呈色。內(nèi)參一般選用高表達的蛋白，因此也可通過內(nèi)參的條帶，觀察WB實驗中的轉膜、顯色等步驟是否有異常。

3對文章發(fā)表絕對重要，增加實驗的可信度。文章內(nèi)放上內(nèi)參的數(shù)據(jù)，較有說服力，文獻審核者也會較相信實驗數(shù)據(jù)。

如何挑內(nèi)參抗體

通常會挑選各細胞或組織間穩(wěn)定表達、并且不受實驗影響的蛋白作為內(nèi)參，但不同的實驗還是有一些細節(jié)要注意，挑選內(nèi)參可參考下面四點：

常用內(nèi)參請見下表：